内容摘要
溶栓和抗血栓治疗受到循环时间短和非靶点出血风险的限制。将血栓聚集策略与光热疗法相结合可以解决这些局限性。利用乙二醇壳聚糖、聚吡咯、氧化铁和肝素，制备了用于靶向血栓输送和溶栓治疗的GCPIH仿生纳米粒。该纳米组装体实现了聚吡咯的精确输送，表现出生物相容性，在多个血栓部位选择性积累，并通过光热激活增强了血栓溶解。溶栓和抗血栓治疗受到循环时间短和非靶点出血风险的限制。将血栓聚集策略与光热疗法相结合可以解决这些局限性。利用乙二醇壳聚糖、聚吡咯、氧化铁和肝素，制备了用于靶向血栓输送和溶栓治疗的GCPIH仿生纳米粒。该纳米组装体实现了聚吡咯的精确输送，表现出生物相容性，在多个血栓部位选择性积累，并通过光热激活增强了血栓溶解。
结果与讨论
聚吡咯具有良好的导电性和吸光性，在生物医学领域具有广阔的应用前景。在本研究中，作者利用吡咯和铁离子(Fe3+)作为氧化剂，在GC的存在下进行化学聚合，形成GCP纳米粒子。GC与PPy表面的偶联提高了其稳定性和定点靶向性，而不显著影响其光吸收能力。作者还利用亚铁离子(Fe2+)共沉淀法在纳米颗粒上实现了磁性IO的原位合成，形成了用于磁控给药的GCPI纳米颗粒。此外，在酸性溶液环境中，H通过对带正电荷的GC和IO的静电吸引而被结合，形成GCPH和GCPIH纳米粒子。在所有已知的生物分子中，H具有最高的负电荷密度，并具有病理靶向性和抗凝血活性。
合成的GCP、GCPH、GCPI和GCPIH纳米颗粒的平均流体力学尺寸分别为121、149、196和263 nm，具有均匀的尺寸分布(多分散指数<0.3)。经H和IO改性后，平均流体力学尺寸增大。为了评估胶体稳定性，将NPs在磷酸盐缓冲盐水(PBS；pH 7.4)和细胞培养液(10%胎牛血清，FBS)中孵育两周，并在第1、4、7和14天监测平均流体力学尺寸。在这两种情况下，GCP和GCPH的颗粒尺寸都略有减小，这可能是由于聚合物NPs的降解所致。相反，IO组分的吸引力导致GCPI和GCPIH NPs倾向于在PBS缓冲器中形成聚集体，导致其颗粒尺寸略有增加。有趣的是，在细胞培养液中观察到GCPI和GCPIH的颗粒尺寸显著减小，这可能归因于原位形成的IO的分解或降解。因此，作者对GCPI和GCPIH NPs进行了降解实验，将NPs放在柠檬酸盐缓冲液(pH 2.5)中以加快降解过程。NPs的降解通过颗粒悬浮液中的颜色变化可见。颜色从黑色过渡到深棕色再到浅棕色，并逐渐变得更加稀释，表明NPs正在逐渐降解。值得注意的是，即使在20天后，GCPIH NPs中仍有一些残留的颜色，而GCPI NPs似乎几乎是透明的。这一观察表明，H涂层提供了额外的保护，防止在酸性环境中降解，导致GCPIH NPs的降解速度较慢。
图中的透射电子显微镜图像显示了GCP和GCPH纳米颗粒的球形结构，GCPI纳米颗粒的半球形结构，以及GCPIH的簇状形态。为了研究壳聚糖基纳米颗粒是否具有响应不同pH环境的电荷转换特性，研究了纳米颗粒在PBS缓冲液(pH 7.4和6.6)中的Zeta电位。在不同的pH值下，由于壳聚糖氨基上的质子化作用，所有NPs的Zeta电位都发生了显著的变化，从负的或近中性的(pH 7.4)变成了正电荷(pH 6.6)。这些结果表明，纳米粒可用于血栓部位的pH响应性药物递送系统。此外，H和IO都带有负电荷，导致GCPH、GCPI和GCPIH的Zeta电位略低于GCP。这一信息暗示了H和IO的成功装饰。
用傅里叶变换红外光谱(FTIR)验证了NPs的组成，并对不同的峰进行了交叉参考。所有NPs在3400、2950、2800、1380、1050和980 cm−1处均有明显的GC和PPy峰。在GCPI和GCPIH的光谱中，分别在580和1629 cm−1处观察到两个显著的IO峰，分别对应于Fe-O振动和Fe-O伸缩。H包覆的GCPH和GCPIH纳米颗粒在1630(N-乙酰化变形)、1468(C-H剪切)、1180(N-硫化)和1100 cm−1(硫酸盐)处有H-特异峰。FTIR分析表明，GC、IO和H成功地连接到PPy上，形成了不同的NP配方。
为了进一步研究 IO 涂层 NPs 的磁性能，作者使用了超导量子干涉装置（SQUID）进行磁性表征。通过绘制 NPs 的磁化率与外加磁场的关系曲线，作者得到了磁化率曲线。磁化曲线表明，GCP 和 GCPH NPs 没有磁性。然而，带有 IO 涂层的 GCPI 和 GCPIH NPs 在没有外加磁场的情况下没有显示净磁化。在有外场的情况下，则会出现很大的磁化值，这表明它们具有超顺磁性。GCPIH NPs 的饱和磁化率略低于 GCPI NPs，这很可能是由于表面存在 H。这些结果表明，外部磁场可以引导 GCPI 和 GCPIH NPs，并有望在生物医学应用中实现磁性靶向。
采用 X 射线光电子能谱（XPS）来确定 NPs 中存在的元素。确定了存在于 NPs 中的元素。在 708-713 eV（Fe 2p3/2）和 723-725 eV（Fe 2p1/2）处观察到峰值。IO 涂层 NPs 在 708-713 eV（Fe 2p3/2）和 723-725 eV（Fe 2p1/2）处观察到峰值，证实了 GCPI 和 GCPIH NPs 中存在铁。此外，GCPH 和 GCPIH NPs 在 168 eV（S 2p）处出现了一个峰，表明硫的存在。硫和铁元素分别归因于 H 和 IO 的存在，这进一步证实了功能性 NPs 的组成。
在 ≈30-800 ℃ 的温度范围内对 NP 配方进行了热重分析（TGA）。GCP 和 GCPH NP 的 TGA 曲线显示出三个显著的失重阶段。第一阶段发生在 30 至 150 ℃ 之间，重量损失≈8-10%，与 NP 湿度有关。第二阶段出现在 150 至 310 ℃ 之间，或与多糖环脱水以及 GC 聚合物和 H 分子分解有关。在最后阶段，在 310 至 800 ℃ 范围内观察到最大重量损失，这可能是由于 PPy 的降解。相比之下，IO 包覆的 GCPI 和 GCPIH NPs 在 530 ℃ 之后显示出剩余重量，表明 NPs 中存在IO。
接下来，作者研究了 H 涂层 NPs 的封装效率（EE）和药物负载率。作者首先用能量色散 X 射线光谱（EDS）测定了每种 NPs 上的元素组成。由于只有 H 含硫，作者可以利用 NPs 中硫的重量百分比来估算 NPs 中 H 的重量百分比。因此，计算得出 GCPH 和 GCPIH 的 EE 都在 85% 左右，而 GCPH 的药物负载率为 8.76%，GCPIH 为 5.57%。作者还通过比色甲苯胺蓝法评估了 H 从 NPs 中的释放曲线。建立了肝素浓度与甲苯胺蓝-肝素吸光度的标准曲线。将 GCPH 和 GCPIH NPs 溶解在 PBS 缓冲液中，在特定时间点离心溶液，收集上清液以测量释放的 H 量。培养 48 小时后，大约 26% 的 H 从 GCPH 中累积释放，19% 的 H 从 GCPIH 中累积释放。这些关于 H 包覆 NP 的详细见解，包括它们的包封效率、药物负载率和释放曲线，为进一步的实验提供了宝贵的信息。
聚吡咯可以吸收近红外区域的光，这是光热转换所必需的。紫外-可见(vis)-近红外吸收光谱显示，所有纳米粒子在750至850 nm之间有一个宽的吸收带，表明它们具有近红外光疗的潜力。为了评估用808nmNIR激光(1.5W cm−2)照射5min时NP溶液的温升分布，作者用温度计监测了温度变化。NP溶液的温度迅速上升到≈60-65°C，而对照组(水)仅略有上升1-3°C。纳米粒子表现出高的光热转换效率≈为29-35%，这表明它们具有光热溶栓治疗的潜力。此外，支持信息显示了GCPIH纳米粒子良好的光热稳定性。当受到连续的激光照射的开关循环时，所达到的最高温度没有显著的下降。这表明，纳米粒子保持了其光热性质，并能在重复激光曝光下有效地产生热量。
在出色的光热转换效率和稳定性的支持下，作者接下来研究了 NPs 能否在激光照射下击碎人工纤维蛋白凝块，从而完成体外纤维蛋白溶解。为了形成凝胶状纤维蛋白凝块，作者在试管中加入了纤维蛋白原、凝血酶和氯化钙溶液。在没有经过激光处理的情况下，将试管翻转数次后，上层的 NP 溶液和下层的纤维蛋白凝块之间会出现一个明显的层。然而，在 808 纳米激光照射下，纤维蛋白凝块通过热能成功溶解，分解了未交联的纤维蛋白聚合物，破坏了纤维蛋白凝块结构。
此外，作者进行了一种更直观的方法，创建了一个Cy5标记的纤维蛋白凝块，并使用荧光图像观察纤维蛋白网络。与大量Cy5荧光的对照组相比，808 nm激光处理的NPs显著崩解了大的纤维蛋白凝块，同时减少了小块的纤维蛋白聚合物。这些结果进一步证实了光热纤溶的良好效果。
除了光热溶解纤维蛋白，作者还根据之前报道的方法，使用体外血凝块溶解模型进行了光热溶栓实验。光热处理成功溶解了25-30% 重量的血凝块。此外，光热处理在血栓溶解中的有效性，红细胞破裂后血红蛋白释放的检测结果也证明了这一点。
生物相容性是纳米医药应用的一个重要特性。在本研究中，作者分别采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）测定法和溶血分析法评估了 NPs 的细胞相容性和血液相容性。首先，将人脐血管内皮细胞（HUVEC）与不同成分和浓度的 NPs 培养 5 天，以评估它们的细胞毒性。在测试条件下，除 GPC NPs 外，大多数 NPs 都表现出可耐受的细胞毒性。接下来，作者用红细胞作为血细胞的主要成分来评估 NPs 的血液相容性。测试了 NPs 使红细胞破裂并导致溶血的能力。用 PBS 和在 PBS 中加入 1% Triton X100 的重悬红细胞（RBC）分别作为阴性和阳性对照。不同处理的红细胞悬浮液离心后的照片，表明 NPs 没有破坏红细胞。作者还通过测量上清液在 540 纳米波长下的吸光度来检测红细胞分解释放的血红蛋白，从而确定溶血率。在应用剂量下，所有NPs 的溶血率都很低，这表明它们具有良好的生物相容性。此外，与GCP和GCPI相比，H 涂层GCPH和GCPIH的溶血率相对较低，这表明 H 涂层改善了材料的生物相容性，使其更适合生物医学应用。
作者还研究了涂有 H 的 NPs 是否具有抗凝活性，这有助于防止继发性血栓形成，并与抗血栓治疗相结合以产生协同效应。为了评估抗凝活性，作者使用了活化部分凝血活酶时间（APTT）测定法，该方法可测量凝血因子的活性。不出所料，PBS、GCP 和 GCPI 样品显示出正常的凝血时间（≈25-35 秒），表明没有 H 修饰的 NPs 没有抗凝活性。相反，在相同的NP浓度下，GCPH和GCPIH的凝血时间分别延长了≈的50 S和300 S以上，表明H包覆的NPs具有有效的抗凝血活性。此外，与GCPH相比，GCPIH样品表现出更好的抗凝性能。这可能归因于H-IO的联合作用，H-IO协同调节凝血过程，发挥更实质性的抗凝作用。结果表明，与H-GC(GCPH)相比，H-IO(GCPIH)表现出更明显的APTT延长。
然后，作者进行了体外靶向实验，以评估基于GC和H涂层的纳米材料的功效。基于GC的纳米材料具有pH值敏感的靶向性，在不同的 pH 值环境中具有表面电荷可转换的特性。在酸性血栓微环境中，这种特性可使带正电荷的 GC 基 NP 增强内皮细胞膜表面负电荷对 NP 的吸收，而不会损伤正常细胞。此外，H 涂层 NPs 还能与血栓形成部位血小板和炎性内皮细胞表达的特异性生物标志物 p-选择素结合。因此，作者假设，由于酸性微环境和炎性内皮细胞过度表达 p-选择素，将 pH 值敏感的 NPs 与 p-selectin 靶向结合可更好地在血栓形成部位聚集。为了证实这些推测，作者用 Cy5 荧光探针标记了 NPs，并检测了紫外-可见吸收光谱，在 650 纳米处出现了一个明显的峰值，表明 Cy5 探针与 NPs 成功结合。
接下来，作者将荧光纳米颗粒与内皮细胞在不同的模拟环境中共同孵育，分别代表正常组织和血栓形成部位的组织微环境，pH分别为7.4和6.6。作者用脂多糖(LPS)诱导内皮细胞炎症反应，这是一种常用的分泌内皮细胞P-选择素的方法。作者将细胞分为四组：1)无内毒素的pH 7.4；2)无内毒素的pH 6.6；3)内毒素的pH 7.4；以及4)内毒素的pH 6.6。NPs的摄取由Cy5-NP(紫色)和细胞核(DAPI，蓝色)的荧光图像表示，作者从荧光图像中定量了Cy5的荧光强度。结果表明，所有NPs在pH 6.6时比在pH 7.4时积累得更好，Cy5荧光强度增加近一倍，表明pH敏感的NPs在低pH环境中具有正电荷，并且比中性或带负电荷的NPs更容易被细胞摄取。此外，GCPH组和GCPIH组细胞在两种pH环境中加入内毒素后，Cy5荧光强度均增加了一倍，说明包被H的NPs通过内毒素诱导的炎症反应对内皮细胞作出反应。然而，未包被H的GCP和GCPI纳米颗粒在内毒素作用下细胞的Cy5荧光强度略有降低。有趣的是，所有GCPI和GCPIH组的Cy5荧光强度都显著高于GCP和GCPH组。这可能是由于IO包被的NPs具有更大的流体动力学尺寸，这往往会形成聚集体并导致更高的荧光强度。这些发现表明，在pH 6.6的环境中，GCPIH NPs在内皮细胞上积累得最好，当用LPS处理时，证实了pH敏感和p-选择素介导的靶向。
靶向策略，如pH敏感和p-选择素介导法，已经显示出有效地将纳米颗粒(NPs)输送到血栓形成部位的潜力。然而，具有磁场的磁导超顺磁GCPI和GCPIH NPs已经证明了更精确地将其输送到所需位置。不幸的是，通过上面讨论的体外井板细胞摄取检查不能刺激局部引导的磁性。此外，为了实现有效的血栓治疗，关键是要考虑血管内皮细胞、血小板激活、凝血因子和血流切应力等因素。因此，目前的体外血栓靶向能力、抗血小板活性和溶栓评估只有在结合这些因素的情况下才可能是可靠的。
为了解决这个问题，作者设计了一个血栓形成VOAC(血管芯片上的器官)模型，使用微流控设备，集成了内皮细胞、人类全血、血流切应力和NP治疗。该模型为评价血栓形成治疗的疗效提供了一种更可靠的体外方法。通过纳入这些关键因素，作者的目标是更全面地了解血栓形成的机制，并促进有效治疗方法的发展。
设备构造过程如图所示。最初，内皮细胞排列在覆盖有细胞外基质(ECM；胶原)的微通道中，以建立具有血管样结构的连续和融合的内皮细胞单层。然后用脂多糖(1μg mL−1)刺激内皮细胞的炎症反应。细胞间黏附分子(ICAM)-1和p-选择素的表达证实内皮细胞的激活。激活的内皮细胞释放几种促凝血因子，然后以动脉样的切变率进行再钙化的人全血灌流。最后，荧光纤维蛋白形成和血小板粘连证实血栓的形成。
将再钙全血注入不同的微流体通道，以研究不同环境下血栓的形成。当只有胶原基质存在时，没有观察到纤维蛋白荧光。此外，在受控剪切率下，只有少数几个血小板可以通过两种重要的受体，整合素a2b1和糖蛋白(GP)VI直接与暴露的胶原结合。融合的HUVECs在基础胶原上培养时显示出较少的血小板黏附和没有纤维蛋白形成，这表明未经处理的内皮细胞可以阻止血细胞接触下面的基质来调节血流。然而，当作者用脂多糖处理内皮细胞时，炎症的内皮细胞有效地导致纤维蛋白的形成和血小板聚集，并与大面积的纤维蛋白共存。这一结果证实了作者可以使用这种微流控设备来监测血栓的形成。
然后，作者评估了这种微流体模型是否可以作为血栓相关研究的药物测试平台。作者在芯片上测试了一些与血栓形成相关的临床药物。首先，在进行抗凝剂检测前，作者评估了H和水飞蓟素与复钙全血混合的治疗剂量。作者观察到H处理和水飞凌处理的装置的纤维蛋白和血小板荧光显著降低。接下来，作者进行了溶栓剂的实验，通过灌流添加重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)的再钙全血。作者发现，在作者的血栓形成VOAC模型中，rt-PA是唯一被批准的治疗急性缺血性中风的药物，在持续灌流下实现了溶栓。这些结果表明，该装置可用于评估血栓治疗，并为进一步的NP研究提供了一个有用的体外模型。
为了研究血栓特异性和磁引导下NPs在血流中的聚集，作者使用了血栓形成VOAC。Cy5标记的NPs在该装置上表现出不同程度的累积。GCPH纳米粒的Cy5荧光强度是GCP的1.8倍，表明血栓特异性的P-选择素靶向可以增强NP在血栓微环境中的积聚。重要的是，作者观察到与GCP组相比，GCPI和GCPIH组的荧光强度显著增加了五倍。在GCPI和GCPIH之间没有发现显著的差异，这表明磁引导性能优于其他靶向策略，并成为作者的纳米地毯递送系统的主导因素。在NP积累的良好结果之后，作者进一步研究了该装置的光热性能和光热溶栓效果。在图中，作者评估了相同浓度的不同NPs的体外温升曲线，发现没有显著差异。因此，作者假设芯片上的光热性能将遵循NP积累的趋势。为了测试这一点，作者使用热像仪监测了激光照射下芯片的局部温度。作者观察到，GCPI和GCPIH纳米颗粒分别灌流到48℃，然后是GCPH和GCP芯片，分别在43℃和38℃下灌流，这一结果与NPs的积累一致。
在NP积累的良好结果之后，作者进一步研究了该装置的光热性能和光热溶栓效果。作者评估了相同浓度的不同NPs的体外温升曲线，发现没有显著差异。因此，作者假设芯片上的光热性能将遵循NP积累的趋势。为了测试这一点，作者使用热像仪监测了激光照射下芯片的局部温度。作者观察到，GCPI和GCPIH纳米颗粒分别灌流到48℃，然后是GCPH和GCP芯片，分别在43℃和38℃下灌流，这一结果与NPs的积累一致。在血栓VOAC研究的最后部分，作者调查了作者的纳米载体的光热加热效应是否可以有效地溶解血栓VOAC设备上的纤维蛋白凝块。接受PBS治疗的组在纤维蛋白结构上没有显著差异，这表明仅靠液体流动不能分解血栓。GCP NP处理没有有效地分解纤维蛋白结构，表明NP积累不足未能达到局部高温破坏纤维蛋白的温度。然而，GCPH NP治疗显示出显著的局部温度上升(43°C)，显示了溶解纤维蛋白凝块的能力，并实现了50%的纤溶效果。GCPI和GCPIH纳米颗粒的积聚和温度升高越慢，导致≈75-80%的光热纤溶。作者设计的纳米载体的血栓靶向能力和光热溶栓性能的出色结果，再加上良好的体外生物相容性，支持进一步的体内动物研究。
最后，采用FeCl3诱导的动物血栓形成模型评价该药的溶栓作用。用FeCl3湿滤纸覆盖肠系膜血管10分钟以诱导血栓形成。血栓形成的时间范围也在辅助资料中描绘。然后系统地将Cy5标记的NPs注射到小鼠体内，并向GCPI和GCPIH组施加磁场以进行磁引导。使用体内成像系统(IVIS)检测NP靶向血栓部位的程度。对照组不作任何处理，无荧光强度。PH敏感组和p-选择素介导的GCPH组的荧光强度是GCP组的1.6倍，这表明H包被的NPs结合到血栓区域高表达p-选择素的内皮细胞和血小板上，实现了血栓特异性靶向策略。磁引导分别作为GCPI和GCPIH的主要靶向策略，其荧光强度分别是GCP的2.6倍和3.0倍，表明磁引导力优于其他血栓特异性靶向策略，如果在精确的位置应用，可以以最高的效率将光热剂输送到血栓部位。与GCPI纳米粒相比，为p-选择素结合添加H略微改善了GCPIH纳米粒在血栓形成血管中的积聚。
为了进一步研究体内光热效应，用 808 纳米激光（1 W cm-2）照射肠系膜血管 7 分钟，并用红外热成像仪监测温度变化。用近红外激光照射的未处理血管显示出≈2-3 ℃的温度波动，这证实了在没有光热剂存在的情况下，近红外激光本身不会产生热量。然而，注入 NPs 的血管显示出不同程度的温度上升，GCP、GCPH、GCPI 和 GCPIH 的最终温度分别为 34、42、52 和 50 ℃。这些结果与 NPs 的积累一致。此外，NPs 的有效积聚和局部高热温度为缓解血管闭塞提供了可能。为了研究体内的治疗效果，作者进行了组织学检查。不出所料，正常血管和氯化铁处理过的血栓血管表现出明显差异，后者表现出血栓闭塞。用GCP NPs 处理的组由于靶向能力低，没有表现出有效的血凝块崩解，导致光热溶栓效应不足。然而，GCPH 处理组在近红外照射下血栓减少了30%，这表明GCPH 双靶向的有效性。GCPI 处理组的血栓减少量≈50%，而 GCPIH 组则显示出强大的溶栓效果，血栓减少量超过75%。根据这些结果，作者得出结论，GCPI和GCPIH突出的磁引导累积性能，以及光热效应，是导致血栓区域大量清除的原因。此外，作者在活体内观察到GCPI和GCPIH在NP积累和温度升高方面没有显著差异。然而，GCPIH组显示出更好的溶栓治疗效果，这可能是由于H包被的纳米颗粒显示出强大的抗血栓活性。GCPIH的溶栓和抗血小板活性的协同作用有助于其非凡的抗血栓性能。为了进一步验证这一点，作者进行了小鼠尾部出血试验，以研究GCPIH纳米粒的体内抗凝活性。与对照组小鼠相比，GCPIH处理的小鼠表现出显著的出血时间、更多的出血量和更高的出血指数。这些结果有力地表明了氢包被的GCPIH纳米粒在体内具有有效的抗凝作用。
此外，作者对纳米粒的药代动力学研究进行了评价。为了研究GCPIH纳米粒的药代动力学，作者将Cy5标记的GCPIH静脉注射到小鼠体内，并监测不同时间点血液中Cy5的荧光强度。NPs的循环半衰期被确定为≈1 h，这为在治疗窗口内进行有效的血栓治疗提供了足够的时间框架。为了了解NPs的生物分布和清除情况，作者在体外进行了不同时间点(注射后4、8、24和48h)主要器官Cy5荧光强度的IVIS分析。结果显示NPs主要聚集在肝脏和肾脏，8h后在心、脾和肺中检测到较低水平的NPs，这表明肝脏和肾脏在GCPIH NPs的清除中起重要作用。这与之前的报道一致，即这两个器官主要代谢GCPIH NPs的一种成分H。
最后，为了评估体内血液相容性，作者比较了对照组和GCPIH治疗组小鼠的血液学参数。有趣的是，大多数参数在两组之间没有显著差异，表明GCPIH纳米粒具有良好的整体血液相容性。然而，值得一提的是，在GCPIH治疗的小鼠中观察到血小板计数略有下降。这种下降可以归因于肝素诱导的血小板减少症(HIT)，这是已知的导致血小板计数减少的原因。此外，作者观察到光热溶栓治疗后血管没有明显的组织损伤，主要组织器官也没有发现不良反应。这些发现共同表明，作者的多功能纳米粒子具有适当的治疗窗口、良好的生物相容性和出色的靶向能力，可实现光热溶栓和抗血栓活性的协同效应。
结论
总之，作者的研究展示了仿生的多臂GCPIH纳米粒子作为一种有前景的纳米药物的发展，用于靶向血栓输送、光热溶栓和抗凝治疗。作者对纳米材料的性能进行了全面的表征，包括尺寸、表面Zeta电位、胶体稳定性、形貌、组成和配方。此外，作者还对纳米颗粒的光热和抗凝性能进行了评价。通过利用血栓形成VOAC评估，作者获得了关于纳米颗粒在血流条件下血栓形成部位的行为和性能的有价值的见解。此外，作者利用FeCl3诱导的血栓形成小鼠模型来检测纳米颗粒的体内性质，从而完成了作者的研究。总之，作者通过体外实验、微流体和体内研究相结合的方式，成功地验证了GCPIH纳米颗粒用于血栓治疗的潜力。这些发现共同证明了GCPIH纳米颗粒作为有效血栓治疗的一种有前途的方法的巨大潜力。
参考文献
A Biomimicking and Multiarm Self-Indicating Nanoassembly for Site-Specific Photothermal-Potentiated Thrombolysis Assessed in Microfluidic and In Vivo Models. Kuan-Ting Liu, Edgar Daniel Quiñones, Ming-Hsin Liu, Che-Wei Lin, Yan-Ting Chen, Chia-Che Chiang, Kevin Chia-Wen Wu, Yu-Jui Fan,* Er-Yuan Chuang,* and Jiashing Yu*，Adv. Healthcare Mater. 2023, 12, 2300682.https://doi.org/10.1002/adhm.202300682
